DETECÇÃO DE Chlamydia trachomatis EM MULHERES BRASILEIRAS POR PCR EM TEMPO REAL USANDO SYBR GREEN I

Resumo

A Chlamydia trachomatis (C. trachomatis) é considerada uma das principais causas de Infecções Sexualmente Transmissíveis (IST), apresentando uma carga global elevada que conta com aproximadamente 100 milhões de novos casos por ano. Para sua detecção diferentes testes podem ser utilizados, com técnicas tradicionais e modernas, que apresentam diferentes níveis de sensibilidade, especificidade e aplicabilidade. Dessa forma, objetivamos propor uma metodologia para identificação e diagnóstico de C. trachomatis baseada na tecnologia da PCR em Tempo Real, utilizando SYBR® Green I como corante fluorescente. Para execução, amostras de DNA genômico, obtidas a partir de secreção vaginal de mulheres atendidas no Ambulatório Especializado da Mulher, em Recife-PE, foram extraídas, utilizando o protocolo do Wizard® Genomic DNA Purification Kit. Primers específicos foram utilizados na detecção de C. trachomatis para gerar um fragmento de 150 pb, usando a técnica da PCR em Tempo Real e o SYBR® Green I como corante fluorescente. A especificidade da reação foi confirmada pelo pico de fusão e validados por eletroforese em gel de agarose a 1%. Após a amplificação foi possível determinar que o pico específico da C. trachomatis é de 77 ± 0,5 °C. A prevalência de infecção por C. trachomatis, para 98 amostras clínicas de secreção vaginal analisadas, foi de 14,3%. Portanto, o protocolo proposto mostrou alta especificidade, sendo uma metodologia rápida, econômica e confiável para a triagem de patógenos da família Chlamydiaceae.